脫水和透明
時間:2020-09-27 17:05
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所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來,以利于有機溶劑的滲入,這一過程稱為脫
水。脫水是否徹底,直接關(guān)系到組織是否能充分透明。一般我們總認為脫水主要跟高濃度酒精有關(guān),
而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系,其實75-80%濃度的酒精具有極強的穿透力,在短時間內(nèi)可以置換出大
量的水份,而高酒精在組織固定不完全時,容易使蛋白質(zhì)凝固,在組織的表面形成一層硬殼,使酒精
難以滲透到組織塊中間去,導(dǎo)致組織脫水不佳;其實高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的
水份,如果脫水時加溫過高(超過35-50℃),使用丙酮等等,都容易導(dǎo)致組織收縮過度和組織發(fā)
硬、發(fā)脆。組織脫水引起的組織發(fā)脆有三種原因:一種是組織固定不佳,酒精起到固定作用,從面引
起組織質(zhì)地發(fā)生改變;第二種是組織本身質(zhì)地有關(guān),如小動物肝臟,在切片時溫度過低導(dǎo)致。第三種
是假脆,是由于的脫水不足,組織在浸蠟時蠟無法滲透到組織中去,組織在高溫下“干烤”導(dǎo)致發(fā)
硬、發(fā)脆,切片會出現(xiàn)粉粉的或一絲絲的現(xiàn)象,子宮肌瘤等較硬的組織還會一棱棱的現(xiàn)象,甚至會整
塊整塊往外崩;嚴重脫水不足的組織中間發(fā)軟,甚至還會有水。
脫水的關(guān)鍵是如何使低濃度的酒精脫水時間和高濃度的酒精脫水時間的正確搭配,低濃度的酒精可以
使組織收縮減少,并使組織更好切,高濃度的酒精使組織脫水更徹底。一般情況下,標本脫水時間
(35℃)以75%酒精1.5小時,85%酒精2小時、95%酒精(2道大)各1個半小時至2小時、純酒精(2
道)各1個半小時至2小時。小標本脫水時間與大標本差異不大,一般沒必要分開,小標本發(fā)脆,往往
是因為紙包太厚或相互粘在一起,導(dǎo)致組織脫水不徹底引起。如果由于時間關(guān)系,也可適當相應(yīng)縮
短。脫水時間長短,與室溫高低有密切的相關(guān),同時也與組織的厚薄,組織類型,組織固定的程度等
條件都有關(guān)。我們在實踐中發(fā)現(xiàn),室溫在15℃左右,可作為一個臨界溫度范圍。當室溫高于此溫度范
圍時,組織容易脫水,可適當縮短脫水時間;而室溫低于該溫度范圍時,應(yīng)適當延長脫水時間。從規(guī)
范化角度出發(fā),應(yīng)該盡可能的減少變量,也就是:溫度、濃度和作用時間。如果一年四季都在一個恒
定的溫度下(35℃)最好,有條件的應(yīng)該買全封閉自動脫水機。更換脫水液,應(yīng)以量為基礎(chǔ),定量更
換。根據(jù)我科經(jīng)驗,如試劑用量為500ml,每500個蠟塊更換一次為宜。在更換脫水液時,不提倡全部
試劑向前退的方法,因為此法不能保證低濃度的酒精的濃度(往往會偏高),所以我們認為85%的酒
精不能退到75%的酒精里,95%的酒精不能退到85%的酒精里,無水酒精不能退到95%的酒精里,而第二
道的95%的酒精可以退到第一道95%的酒精里,第二道無水酒精也可以退到第一道無水酒精里(如果純
酒精要退到95%酒精里,可用比重計測量,加水或加純酒精)。要保證各梯度酒精的真正濃度。只有
這樣才能做好每一批組織。常規(guī)切片脫水的原則就是在最短的時間內(nèi),使組織脫水徹底,收縮度、硬
度適中,切片舒展、好切。
透明:
為了使石蠟?zāi)軌蚪氲浇M織塊內(nèi),必須經(jīng)過一種既能與脫水劑混合,又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì),這
個過程稱透明。目前最好的透明劑是二甲苯。
很多人認為二甲苯極容易使組織發(fā)脆,這個觀點并不正確,在固定充分、脫水徹底的情況下,
二甲苯并不會引起組織發(fā)脆,相反會使某些組織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織(比如子宮肌瘤等)由于透明充
分而變的更好切。而所謂的發(fā)脆,往往是組織浸蠟充分,使組織恢復(fù)到其原有的質(zhì)地,在蠟塊冰凍的
情況下產(chǎn)生的,如果用冰水或常溫切片,就不會有脆的現(xiàn)象。所以二甲苯透明(2道)各30-60分鐘,
如果有時間,時間可以更長,透明充分,蠟也能浸的更充分。但當組織內(nèi)有極少量水份,二甲苯在高
溫下將水置換出來,導(dǎo)致組織干烤,可能會導(dǎo)致組織發(fā)硬。
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