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病理組織脫水機(jī)使用技巧
時間:2024-12-02 15:57
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病理脫水機(jī)是一種專門用于病理組織脫水的設(shè)備,它通過一系列化學(xué)試劑的置換,將組織中的水分去除,以便后續(xù)的染色和顯微鏡檢查。
步驟 | 試劑及時間 |
1 | 10%的甲醛液2小時 |
2 | 80%的乙醇3小時 |
3 | 95%的乙醇(Ⅰ)2小時 |
4 | 95%的乙醇(Ⅱ)1小時 |
5 | 無水乙醇(Ⅰ)1小時 |
6 | 無水乙醇(Ⅱ)1小時 |
7 | 無水乙醇+丙酮(4:1)0.5小時 |
8 | 二甲苯(Ⅰ)0.5小時 |
9 | 二甲苯(Ⅱ)0.5小時 |
10 | 石蠟(Ⅰ)1小時 |
11 | 石蠟(Ⅱ)1小時 |
12 | 石蠟(Ⅲ)1小時 |
13 | 包埋 |
使用技巧
在使用病理脫水機(jī)時,有一些技巧可以幫助提高工作效率和脫水質(zhì)量:
1. 組織固定:組織在進(jìn)入80%的乙醇前應(yīng)在10%的甲醛液固定不少于2小時。
2. 試劑更換:根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體情況,可能需要定期更換脫水試劑,以保證脫水效果。
3. 組織大小:不同的組織大小可能需要不同的脫水程序,例如小標(biāo)本(如腎穿、肝穿等)可能需要更短的脫水時間。
4. 安全性:在操作過程中,需要注意安全,比如穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備,避免接觸有害化學(xué)試劑。
組織樣本處理
1.1 脫水:
脫水的目的在于將固定后組織內(nèi)的水分逐漸置換出來,利于透明劑和石蠟的滲入。
脫水劑的種類可以分為非石蠟溶劑脫水劑和石蠟溶劑脫水劑,前者脫水后必須經(jīng)過透明劑透明方可浸蠟,后者在脫水后可直接浸蠟。目前病理實(shí)驗(yàn)室常用的脫水劑為乙醇,屬于非石蠟溶劑脫水劑,乙醇作為脫水劑的優(yōu)點(diǎn)在于其與水的‘相似相溶原理’對梯度配比兼容性高且成本相對較低也更安全,利用濃度差可將組織水分置換出來,且多梯度乙醇脫水可以在迅速脫水的基礎(chǔ)上較好的保持組織形態(tài),利于透明和浸蠟更好地進(jìn)行。
1.2 透明:
在乙醇脫水后的組織,需經(jīng)過一種既與乙醇結(jié)合又與石蠟結(jié)合的溶劑作為媒介使石蠟浸入組織,這種溶劑會使組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài),過將這個過程稱為透明。
目前病理實(shí)驗(yàn)室最常用的透明劑為二甲苯,一種無色透明但有刺激性味道的液體,二甲苯使用不當(dāng)會讓組織收縮變脆,因此二甲苯透明的時間在組織處理過程中也十分重要。
1.3 浸蠟:
浸蠟的目的是置換組織中的透明劑,石蠟滲入組織后,經(jīng)冷凍使組織變硬為蠟塊,利于切成薄片稱為石蠟切片。
目前病理實(shí)驗(yàn)室通常使用熔點(diǎn)為58~60℃的石蠟將組織浸蠟,在密閉式全自動脫水劑中通常也會設(shè)置加壓來加速浸蠟時間。
需要注意的是:在脫水之前需對脫水機(jī)進(jìn)行程序設(shè)定:
前面也提到目前病理實(shí)驗(yàn)室都會選擇用全封閉式全自動脫水機(jī),而全自動脫水機(jī)使用過程中最重要的環(huán)節(jié)就是脫水程序的設(shè)置。
通??梢酝ㄟ^組織大小將脫水程序設(shè)置為大樣本脫水程序和小樣本脫水程序。大樣本脫水程序時間長,小樣本脫水程序時間短。
小樣本脫水程序的梯度乙醇(70%、80%、90%和無水乙醇)脫水時間通常為常溫每缸40 min~1 h、二甲苯透明時間通常為常溫每缸30 min~40 min、石蠟浸蠟時間通常為每缸1 h,溫度設(shè)置為高于石蠟熔點(diǎn)2℃左右。
大樣本脫水程序的梯度乙醇(70%、80%、90%和無水乙醇)脫水時間通常為常溫每缸1 h~1.5 h、二甲苯透明時間通常為常溫每缸40 min~50 min、石蠟浸蠟時間通常為每缸1.5 h,溫度設(shè)置為高于石蠟熔點(diǎn)2℃左右。
另外,脫水機(jī)需定期進(jìn)行換液:
全自動脫水機(jī)需要定期換液,換液周期通常根據(jù)處理組織樣本的數(shù)量決定,具體的換液方式也都根據(jù)不同病理實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況而決定:可以全部換新也可以將第一缸試劑廢棄,后缸前移然后補(bǔ)充最后一缸新試劑。