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制片技術(shù)

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病理石蠟切片機(jī)使用技巧

時間:2024-12-02 15:49

點(diǎn)擊數(shù):8

在使用不同包埋介質(zhì)進(jìn)行切片時,經(jīng)常會遇到一些相似的問題。比如,切片厚度不均勻、切片過程跳動或者切面不規(guī)則等,這些情況通??梢酝ㄟ^調(diào)整切片刀的角度來改善。如果發(fā)現(xiàn)切片表面出現(xiàn)波紋、劃痕或受到污染,問題可能在于切片刀變鈍,重新打磨刀刃或更換刀片通??梢越鉀Q。若切片上出現(xiàn)垂直的細(xì)長劃痕或裂紋,可能是由于刀刃有缺口或者標(biāo)本中含有硬質(zhì)異物或雜質(zhì)。若換位置切片后劃痕仍然在同一處,則可以推測是組織中有如鈣化物、砂礫或其他硬性物質(zhì),而不是刀刃的問題。如果組織過于柔軟,往往是因為脫水或透明化處理不充分,將組織重新浸泡處理后再試可能會有所改善,盡管修復(fù)后的效果可能與標(biāo)準(zhǔn)切片有所不同??偟膩碚f,切片過程中可能出現(xiàn)多種問題,接下來將針對幾種常見的情況進(jìn)行具體說明。

常用一次性刀片:


 

型號

刀片材質(zhì)

刀片長度(mm

刀片厚度(mm

刀片寬度(mm

徠卡818

高級碳鋼

80

0.25

8

徠卡819

不銹鋼/碳鋼

80

0.25

8

羽毛R35

3CR13不銹鋼

80

0.25

8

羽毛S35

金屬

80

0.25

8

 


切片蠟帶彎曲

切片蠟帶彎曲,是由于蠟塊的上下兩邊與刀片的水平線不平行造成的(1 。切片時蠟塊要放正,保證底緣與刀片的水平線平行,不能一邊高一邊低(2) 。

 image.pngimage.png

   圖(1)              圖(2

切片出現(xiàn)空洞

 

切片中出現(xiàn)空洞(如圖3~6所示)不僅影響切片的外觀,更重要的是可導(dǎo)致病理醫(yī)生在診斷過程中遺漏重要信息。如果隨著連續(xù)深切,空洞逐漸變小,則說明這是由于切片未完全切到而引起的操作性問題。當(dāng)切蠟塊時施加的力量過猛過大,組織中的小塊或小點(diǎn)可能會從蠟塊中脫落,從而在切片中形成小空洞。這種現(xiàn)象在脫水、透明或浸蠟處理過度的組織中尤為常見,特別是對于肝、脾、腎、腦、淋巴結(jié)以及子宮等組織標(biāo)本。如果取材過薄,容易導(dǎo)致處理過度,從而增加蠟塊在粗修和切片時出現(xiàn)空洞的風(fēng)險。因此,取材時需要注意標(biāo)本的厚度應(yīng)適中,避免過薄。

    

如果遇到這樣的蠟塊,可以先將其在冰盤上冷卻片刻,或者用濕棉花輕輕沾濕蠟塊表面,再進(jìn)行切片時注意減輕刀刃的壓力,避免用力過猛,以減少人為空洞的發(fā)生。如果切片時發(fā)現(xiàn)蠟帶上的組織中出現(xiàn)空洞,而蠟塊中的組織仍然充足,則應(yīng)嘗試緩慢切片,直至空洞消失。此外,空洞也可能是由于浸蠟過程中蠟液中混入了空氣,尤其是在肺組織標(biāo)本中,這種問題更為常見。即使連續(xù)切片,空洞也可能難以消失,需要特別注意浸蠟時的操作細(xì)節(jié)。

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3. 闌尾組織,包埋時3塊組織沒有同時埋平,不在同一水平線,切片時造成右下角的一塊組織沒有切全,形成人為穿孔的假象

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4. 蠟塊粗修時沒有完全修全,組織沒有充分暴露最大面就急于裱片,切片上形成許多不規(guī)則的空洞

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5. 組織內(nèi)含有類似蟲卵一類的大量異物,因質(zhì)地與組織不同,故切片時蟲卵從蠟塊中蹦出形成空洞

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圖6. 當(dāng)切蠟塊用的力太猛太重時,組織中的小斑點(diǎn)、小斑塊從蠟塊中脫落,在切片上留下一個個小空洞

切片時蠟帶不能形成

這一現(xiàn)象的原因可能是因為刀太鈍、刀的角度太傾斜、蠟太硬(即使用的石蠟熔點(diǎn)太高)或室溫太低。蠟帶的形成是依賴于切片時蠟塊產(chǎn)生摩擦致熱而導(dǎo)致蠟片相互連接。如果刀冷,切片時不足以產(chǎn)熱,蠟片就無法相連。

切片隨著蠟塊的運(yùn)動而運(yùn)動

這一現(xiàn)象的原因可能是因為室溫太高,或蠟太軟而產(chǎn)生。如果蠟帶不能連續(xù),可以先單張切片,再用鑷子或細(xì)長的竹簽沿蠟塊的底端平行牽拉,方可形成蠟帶(7) 。

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推薦使用泰維R245型 半自動切片機(jī)

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★ 采用國際先進(jìn)的進(jìn)口步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動,切片精度高,運(yùn)行平穩(wěn)安靜。

● 高清彩色觸摸屏中英文菜單控制切片厚度、修片厚度、切片記數(shù)及快進(jìn),快退和轉(zhuǎn)換功能。

★ 高精準(zhǔn)度的進(jìn)給系統(tǒng):25600細(xì)分?jǐn)?shù)的高精密控制器搭配高精度光電傳感系統(tǒng),確保0.1μm切片精度;

★ 雙進(jìn)樣系統(tǒng):具備機(jī)械小搖輪和電動按鍵雙進(jìn)樣模式,更好的滿足不同操作者的使用習(xí)慣;



切片出現(xiàn)搓衣板或波紋樣改變

波紋或振顫問題的產(chǎn)生,多數(shù)是由于蠟塊未夾緊或刀片未在切片機(jī)上擰緊所致。此外,機(jī)械部件老化或切片機(jī)松動也是潛在原因之一。同時,刀片傾斜角度過大也可能導(dǎo)致切片出現(xiàn)波紋。這種現(xiàn)象尤其常見于質(zhì)地較硬的組織蠟塊,例如子宮肌瘤標(biāo)本。波紋狀的震顫通??梢栽谄壑腥庋塾^察到。針對堅硬或堅韌的組織蠟塊,可以采用表面軟化處理來改善切片質(zhì)量,具體操作如下:

 

1. 鹽酸軟化:將蠟塊出現(xiàn)裂隙的一面朝下放入5 mol/L鹽酸溶液的容器中(可為玻璃或塑料容器),浸泡510分鐘后取出,用干紗布擦去蠟塊表面的鹽酸。

2. 切片:無需冷凍蠟塊,在室溫(約25℃)下直接使用切片機(jī)切片,切片厚度建議為4μm。

3. 漂片與裱片:將切片光面朝下放入冷水中,隨后用干凈的載玻片移入漂片儀的水槽中(溫度約為45-47℃),待切片展平后迅速裱貼在載玻片上。

4. 后續(xù)處理:按常規(guī)方法對切片進(jìn)行烘烤、染色和封固處理。

振顫或微小振動的出現(xiàn),通常與組織處理時的脫水過度密切相關(guān)。此外,刀片過鈍、傾斜角度過大以及切片速度過快也會引發(fā)類似問題。如果確實(shí)是由于脫水過度造成組織變硬,可以使用濕紗布或棉花蘸取少量溫水,輕輕涂抹蠟塊表面,以增加濕度。這種方法在處理淋巴結(jié)等含水量低的組織時尤為有效。如果取材過薄,經(jīng)過脫水處理后組織容易變得質(zhì)地堅硬,切片時易出現(xiàn)振顫或微小振動,進(jìn)而損傷組織結(jié)構(gòu),影響病理醫(yī)生的診斷。

此外,密集的顫痕可能是刀片過鈍或傾斜角度不當(dāng)造成的,導(dǎo)致蠟塊在切片時不是被切割,而是被下,甚至出現(xiàn)搓衣板樣的紋路(如圖8所示)。為避免這種情況,應(yīng)確保刀片鋒利、調(diào)整刀片角度并減緩切片速度,避免用力過猛,從而提高切片質(zhì)量。

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圖8. 切片出現(xiàn)搓衣板樣改變

有時,切片刀“”進(jìn)了蠟塊,會留下一道較深的印痕(9) 。這類情況多數(shù)是由于切片前蠟塊沒有夾緊,或切片刀沒有擰緊。在為了切全切深的過程中將會造成組織的浪費(fèi)。如果蠟塊或切片刀松動,切片刀就會“吃”進(jìn)蠟塊里,造成蠟塊破壞、組織損傷,切片難以完整。

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圖9. 切片刀“”進(jìn)蠟塊,留下一道較深的印痕